1.实验前将所有试剂平衡至室温，包括样本、TMB（非常重要）。

2.强烈建议老师在操作的时候每个样本包括标准品做复孔（请务必这样操作），因为这样可以：求平均值，确保实验结果的准确性对试剂盒的性能进行评估 对自己的操作进行评估解决跳孔

3.为保证老师 ELISA 实验结果准确 ，其中几点重要的操作注意事项请务必参考：如果以下表述与说明书中不一致，请按照实验对应说明书的要求操作 。

1）标准品溶解：标准品溶解严格按照说明书进行操作，建议老师进行标准品稀释时，在EP管中进行。

2）孵育：说明书中进行孵育的时候，一定要用微孔板振荡器振荡，这个很重要，利于抗原抗体充分结合。

3）洗板：建议按照说明书操作，每次洗涤至少洗液浸泡30s，重复6次，洗板时间太短、次数太少会导致实验效果不佳，延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。

4）如何控制标曲显色(仅针对双抗夹心法ELISA试剂盒)5 .30分钟显色时间为经验范围，每个具体的实验，可根据以下情况，确定大致的显色时间：

①肉眼观察：标曲S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止。

② 仪器判断：630 nm左右波长下，ac标曲S1孔的OD值达到0.5 - 0.7、S5孔的OD值达到0.05 - 0.08、Blank孔的OD值小于0.05时，即可终止。

③ 高敏系列试剂盒因灵敏度更高，需严格控制显色时长，可较普通试剂盒适当缩短显色时间。
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