冻存盒操作
方法一：使用程序冻存盒  
使用程序降温盒是最-常用的冻存方法。市面上的降温盒有些需要添加异丙醇，有些则不需要。  
降温盒须恢复室温后再使用。  
根据普诺赛实验室细胞培养经验，使用程序冻存盒冻存效果良好，没有冻存盒的同学可以参照下文方法二和方法三。  
操作步骤  
步骤1：配制程序冻存液，放在室温备用或放在4℃预冷  
步骤2：离心收集对数生长期的细胞（贴壁细胞消化下来离心，悬浮细胞直接离心，转速1200rpm或250g，时间3min）  
步骤3：用配制好的冻存液重悬细胞，按照1~1.5mL/管分装到冻存管中，拧紧管盖，做好标记  
步骤4：冻存管放入冻存盒，冻存盒放入-80℃冰箱过夜（24h）  
步骤5：冻存管从冻存盒取出，转移至液氮长期保存  
使用冻存盒操作示意图  
▲使用冻存盒操作示意图  
方法二：使用无血清非程序冻存液  
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液，无需自己配制，无需降温盒，大大提升了便捷性。  
但是，并非所有细胞都适用于这种冻存液，使用前必须做冻存测试，没问题后再批量应用。  
操作步骤  
步骤1：从冰箱拿出无血清非程序冻存液，待用  
步骤2：离心收集对数生长期的细胞（贴壁细胞消化下来离心，悬浮细胞直接离心，转速1200rpm或250g，时间3min）  
步骤3：弃上清，加入适量无血清非程序冻存液，重悬细胞  
步骤4：按照1~1.5mL/管的量分装到冻存管中，拧紧管盖，做好标记  
步骤5：将冻存管直接移入-80℃冰箱中，24h后转移至液氮长期保存  
使用无血清非程序冻存液操作示意图  
▲使用无血清非程序冻存液操作示意图  
方法三：手动梯度降温  
在没有冻存盒或者非程序冻存液时，可以选择手动梯度降温。但手动梯度降温不适用于所有细胞，且效果不稳定，同样需要先做冻存测试。  


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