外泌体(exosome)

 外泌体外泌体(exosome)是由细胞特异性分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量

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 外泌体
外泌体(exosome)是由细胞特异性分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能,参与细胞间的通讯。然而关于它的分泌和摄取及其组成、“运载物"及相应功能的准确分子机制目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。李记生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,经过优化处理,适用于细胞培养上清液(尿液等)中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒,可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。
操作规程
一、样品预处理
1.取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻,将*融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上。
2.样品初始用量:对于细胞上清样品,单次提取时的样品量至少为20 mL。
3.离心去除细胞碎片:将样品转移至离心管中,4℃,3000×g离心10 min,取上清转移到新离心管中。
二、提取外泌体
1.上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中加入外泌体浓缩试剂(ECS),加入ECS的量与细胞上清液的体积比为1:4.即若细胞上清液液体积是20 mL,则ESC的量为5 mL。
2.溶液混合:加入ECS试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1 min,再放置于2℃至8℃静置2 h。
3.沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管,4℃以10000×g离心60 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒。【注】:尽可能吸净上清液。
4.外泌体重悬:取100μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物,待其均匀悬浮在PBS中后,将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中。
5.收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5 mL离心管,4℃以12000×g离心2 min,保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒。
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